PCR ප්රතික්රියා වල මැදිහත්වීමේ සාධක

පීසීආර් ප්රතික්රියා වලදී, සමහර මැදිහත් සාධක බොහෝ විට හමු වේ.
PCR හි ඉතා ඉහළ සංවේදීතාව හේතුවෙන්, අපවිත්ර වීම PCR ප්රති results ලවලට බලපාන වැදගත්ම සාධකයක් ලෙස සැලකෙන අතර ව්යාජ ධනාත්මක ප්රති .ල ලබා ගත හැකිය.
ව්යාජ-නිෂේධාත්මක ප්රති .ල ලබා ගැනීමට හේතු වන විවිධ ප්රභවයන් සමානව විවේචනය කරයි. PCR මිශ්රණයේ අත්යවශ්ය කොටස් එකක් හෝ කිහිපයක් තිබේ නම් හෝ විස්තාරණ ප්රතික්රියාව බාධක හෝ මැදිහත් වී ඇත්නම්, රෝග විනිශ්චය තක්සේරුව බාධා කළ හැකිය. මෙය කාර්යක්ෂමතාව සහ ව්යාජ නිෂේධාත්මක ප්රති .ල අඩු කිරීමට හේතු වේ.
නිෂේධනය සඳහා අමතරව, නියැදි සකස් කිරීමට පෙර නැව්ගත කිරීම සහ / හෝ ගබඩා කිරීමේ කොන්දේසි හේතුවෙන් ඉලක්ක න්යෂ්ටික අම්ල අඛණ්ඩතාව හේතුවෙන් ඉලක්ක න්යෂ්ටික අම්ල අඛණ්ඩතාව ඇතිවිය හැක. විශේෂයෙන්, ඉහළ උෂ්ණත්වයක් හෝ ප්රමාණවත් නොවන ආචරණයක් සෛල හා න්යෂ්ටික අම්ල වලට හානි කිරීමට හේතු විය හැක. සෛල හා පටක හා පැරෆින් කාවැද්දීම ඩීඑන්ඒ කැබලි කිරීම සහ නිරන්තර ගැටලුවක් සඳහා ප්රසිද්ධ හේතූන් වන්නේ (රූප 1 සහ 2 බලන්න). මෙම අවස්ථා වලදී, ප්රශස්ත හුදෙකලාව හා පිරිසිදු කිරීම පවා උපකාරී නොවේ.

රූපය 1 | ඩීඑන්ඒ අඛණ්ඩතාව පිළිබඳ නිශ්චලකරණයේ බලපෑම
Agarose ජෙල් ඉලෙක්ට්රෝෆොරසිස් පෙන්වා දුන්නේ ඩීඑන්ඒ හි අස්ථිර අංශවලින් හුදෙකලා වූ ඩීඑන්ඒ හි ගුණාත්මකභාවය සැලකිය යුතු ලෙස වෙනස් වූ බවයි. සවි කිරීමේ ක්රමය අනුව උපුටා ගැනීමේ ක්රමයේ දිග විවිධ සාමාන්ය කැබලි වල DNA හි ඩීඑන්ඒ ඇත. ඩීඑන්ඒ සංරක්ෂණය කළේ ස්වදේශික ශීත කළ සාම්පලවල සහ උදාසීන මධ්යස්ථ නියැම්පින් වල සවි කර ඇති විට පමණි. දැඩි ආම්ලික බූබන් සවි කිරීම හෝ නොකැඩූ, ආකෘති සහිත ආකෘති සහිත ආකෘති අඩංගු වන නිරවද්යතාවයේ බලපෑම නිසා ඩීඑන්ඒ සැලකිය යුතු ලෙස භාවිතා කිරීම. ඉතිරි කොටස බෙහෙවින් ඛණ්ඩනය වී ඇත.
වම් පසින්, කොටස් දිග කිලෝබේස් යුගල (කේබීපී) වලින් ප්රකාශ වේ

රූපය 2 | න්යෂ්ටික අම්ල ඉලක්කවල අඛණ්ඩතාව නැතිවීම
(අ) කෙඳි දෙකෙහිම 3 '5' පරතරයක් ඉලක්කගත ඩීඑන්ඒ හි බිඳ වැටෙනු ඇත. ඩීඑන්ඒ සංශ්ලේෂණය තවමත් කුඩා කැබැල්ලක සිදු කරනු ඇත. කෙසේ වෙතත්, ඩීඑන්ඒ කැබැල්ලේ ප්රාථමික ආනිපතා වෙබ් අඩවියක් අස්ථානගත වී ඇත්නම්, රේඛීය විස්තාරණ විස්තාරණය පමණක් සිදු වේ. වඩාත් හිතකර අවස්ථාවක, කොටස් එකිනෙකා නැවත සකස් කළ හැකි නමුත් අස්වැන්න කුඩා හා හඳුනාගැනීමේ මට්ටමට වඩා කුඩා වනු ඇත.
. දිගටි උනුසුම් අවධියේදී, ප්රාථර්ස් න්යාසය ඩීඑන්ඒ වෙතින් දිය වී නොනවතින තත්වයන් යටතේ වුවද නිර්වචනය නොකරනු ඇත.
(ඇ) යාබද තයිමීන් කඳවුරු ටීටී ඩිමර් සාදයි.
අණුක රෝගාදනය කිරීමේදී බොහෝ විට සිදුවන තවත් පොදු ගැටළුවක් වන්නේ සංසිද්ධි-ක්ලවුරෝෆෝම් නිස්සාරණයට සාපේක්ෂව ඉලක්ක න්යෂ්ටික අම්ලගේ දෘෂ්ටි මාධ්යයට වඩා අඩු මුදා හැරීමයි. ආන්තික අවස්ථාවන්හිදී, මෙය ව්යාජ නිෂේධනයන් සමඟ සම්බන්ධ විය හැකිය. න්යෂ්ටික අම්ල මුදා හැරීම නිසා ලයිසිස් හෝ එන්සයිමැටික් ජීර්ණය කිරීමෙන් වැඩි කාලයක් ගත කළ හැකි නමුත් මෙම ක්රමය බොහෝ විට අඩු PCR සංවේදීතාවයේ ප්රති results ල ලබා ගත නොහැක.

විස්තාරණය අතරතුර පොලිමෙරමේස් ක්රියාකාරකම් නිෂේධනය කිරීම

පොදුවේ ගත් කල, සුබොප්මල් පීසීආර් ප්රති .ලවලට තුඩු දෙන සියලු සාධක විස්තර කිරීම සඳහා බහාලුම් සංකල්පයක් ලෙස නිෂේධනය භාවිතා කරයි. දැඩි ලෙස ජෛව රසායනික අර්ථයකින්, නිෂේධනය එන්සයිමයේ ක්රියාකාරිත්වයට සීමා වේ, එනම්, එනම්, ඩීඑන්ඒ පොලිමරේස් හෝ එහි colyomerase හි ක්රියාකාරී අඩවිය හරහා උපස්ථර-නිෂ්පාදන පරිවර්තනය අඩු කරයි (උදා
නියැදියේ හෝ විවිධ බෆර් අඩංගු සංරචක සහ ප්රතිසංස්කරණ අඩංගු සාරය සෘජුවම බාධාවකින් තොරව, එහි සම්බන්ධීතාවයේ එන්සයිමයට හෝ උගුලට හසු නොවී, එමඟින් පොලිමරේට් අක්රිය කිරීම සහ අක්රීය හෝ ව්යාජ negative ණාත්මක PCR ප්රති .ල ලබා ගත හැකිය.
කෙසේ වෙතත්, ප්රතික්රියා සංරචක සහ ඉලක්ක අඩංගු න්යෂ්ටික අම්ල අතර බොහෝ අන්තර්ක්රියා ද 'පීසීආර් නිෂේධක' ලෙස නම් කරනු ලැබේ. සෛලවල අඛණ්ඩතාව හුදකලාව නිසා කඩාකප්පල් වූ පසු න්යෂ්ටික අම්ලය මුදා හරිනු ලැබේ, නියැදිය සහ ඒ අවට විසඳුම අතර අන්තර්ක්රියා ඇති වේ. නිදසුනක් ලෙස, 'මංකොල්ලකරුවන්ට' සහජීවනය නොලැබූ අන්තර්ක්රියා මගින් තනි හෝ ද්විත්ව නිම කළ ඩීඑන්ඒ හෑන්ඩ් කර හුදකලා කිරීම සහ පවිත්ර කිරීම සඳහා හුදකලා කිරීම හා පවිත්ර කිරීම සඳහා බාධා කිරීම, අවසානයේ PCR ප්රතික්රියා කිරීමේ යාත්රාව වෙත ළඟා වන ඉලක්ක ගණන අඩු කිරීමෙන්.
පොදුවේ ගත් කල, පීසීආර් නිෂේධකයන්ට බොහෝ ශරීරයේ තරල හා රුධිර රෝග විනිශ්චය සඳහා භාවිතා කරන ප්රතික්රියාකාරක (රුධිරයේ, හිමොග්ලොබින්, මේදය, මේදය, CA2 + IONs) සහ පරිසරයේ සංරචක (සංසිද්ධි, බැර ලෝහ)

වැඩි ප්රචලිත පීසීආර් නිෂේධක බැක්ටීරියා සහ යුකැරියෝටික් සෛලවල, ඉලක්කගත නොවන ඩීඑන්ඒ, ඉලක්කගත නොවන ඩීඑන්ඒ, අත්වැසුම් හා ප්ලාස්ටික් වැනි පටක ආධුනික හා රසායනාගාර උපකරණවල ඩීඑන්ඒ-බන්ධනය කරන්න. නිස්සාරණය අතරතුර හෝ පසුව න්යෂ්ටික අම්ල පිරිසිදු කිරීම යනු PCR නිෂේධක ඉවත් කිරීම සඳහා වඩාත් කැමති ක්රමයයි.
අද, විවිධ ස්වයංක්රීය නිස්සාරණ උපකරණ බොහෝ අතින් ප්රොටෝකෝල ප්රතිස්ථාපනය කළ හැකි නමුත් 100% ක් යථා තත්ත්වයට පත්වීම සහ / හෝ පවිත්ර කිරීම කිසි විටෙකත් සාක්ෂාත් කර ගෙන නොමැත. පිරිසිදු කරන ලද න්යෂ්ටික අම්ලවල විභව නිෂේධකයින් තවමත් සිටිය හැකිය. නැතහොත් දැනටමත් ක්රියාත්මක වී ඇත. නිෂේධකයන්ගේ බලපෑම අඩු කිරීම සඳහා විවිධ උපාය මාර්ග පවතී. සුදුසු කොලොමියන්ගේ තේරීම නිශ්චය කිරීමේ ක්රියාකාරකම් කෙරෙහි සැලකිය යුතු බලපෑමක් ඇති කළ හැකිය. PCR නිෂේධනය අඩු කිරීම සඳහා වෙනත් ඔප්පු කරන ලද වෙනත් ක්රමවේදයන් බහුරාජක සාන්ද්රණය වැඩි කිරීම හෝ BSA වැනි උපකරණ යෙදීම.
පළාත් සභා ප්රතික්රියා නිෂේධනය කිරීම අභ්යන්තර ක්රියාවලි තත්ත්ව පාලනය (IPC) භාවිතයෙන් පෙන්නුම් කළ හැකිය.
ඛනිජික් අම්ලය, එතනෝල්, එටා, සීටාබ්, ලික්ල්, ගුස්, ඉසොප්රෝනෝල් සහ ෆීනෝල් ​​වැනි සියලුම ප්රතික්රියාකාරක සහ අනෙකුත් විසඳුම් ඉවත් කිරීමට සැලකිලිමත් විය යුතුය. ඔවුන්ගේ සාන්ද්රණය මත පදනම්ව, ඔවුන් PCR සක්රිය හෝ නිෂේධනය කළ හැකිය.